一、概述

　　兔單抗與傳統的雜交瘤鼠單抗相比具有更好的抗原識別功能。由于兔骨髓瘤細胞株受專利保護，無法利用雜交瘤技術開發兔單抗，普健生物建立了噬菌體展示抗體文庫技術平臺以及新型的Xten™ Mab Single B兔單克隆抗體開發技術平臺。

　　單個B細胞抗體制備技術是近年來新發展的一類快速制備單克隆抗體的技術，是根據每一個B細胞只含有一個功能性重鏈可變區DNA序列和一個輕鏈可變區DNA序列，以及每一個B細胞只產生一種特異性抗體的特性，從免疫動物脾組織或外周血中分離抗原特異性B細胞，通過單細胞PCR技術從分泌抗體的單個B細胞中擴增IgG重鏈和輕鏈可變區基因，然后在哺乳動物細胞內表達并獲得具有生物活性的單克隆抗體。

圖1. Xten^TM Mab 兔單克隆抗體開發流程

　　二、服務內容

　　案例展示：

　　利用兔單B 抗體技術開發Anti-human CD86 兔單抗。選取血清效價大于128K 的兔子，分離PBMC細胞進行流式分選， 獲得human CD86抗原特異性B細胞鋪板。

圖1 兔單B 細胞流式分選結果

　　使用普健生物XtenCHO高密度瞬轉表達系統，體外重組表達部分陽性克隆抗體，純化后進行功能驗證。

圖2 兔單抗重組表達分析

　　純化后的抗體進行IF及內源WB 驗證。IF結果顯示抗體靈敏度高，抗原定位正確;內源WB 結果顯示，主帶明顯，無非特異性結合條帶。

圖3 Anti-human CD86 兔單抗IF 檢測結果

RAJI細胞，一抗1:50，二抗1:50， 曝光時間30ms

圖4 Anti-human CD86 兔單抗內源WB分析

Lane 1: Daudi cell lysate ;Lane2: Raji cell lysate.